Teste De Sangue Imunoensaio Em Parasitologia

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Teste De Sangue Imunoensaio Em Parasitologia
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Um ensaio de imunoabsorção enzimática é realizado quando surgem dificuldades com o diagnóstico, se o paciente tem uma predisposição hereditária a certas doenças, para avaliar a eficácia do tratamento. O ELISA é um teste laboratorial moderno que ajuda a identificar anticorpos específicos no sangue para certas doenças. O método é altamente específico e sensível.

O conteúdo do artigo:

  • 1 imunoensaio
  • 2 Conceitos básicos e princípio do método de imunoensaio enzimático
  • 3 diferentes classes de anticorpos IgG, IgM, IgA

    • 3.1 anticorpos IgM
    • 3.2 anticorpos IgG
    • 3,3 anticorpos IgA
  • 4 vantagens do método
  • 5 desvantagens do método
  • 6 indicações para consultas e doenças detectáveis
  • 7 O biomaterial analisado e características de seu acervo
  • 8 Momento de preparação dos resultados de ELISA
  • 9 Interpretação do imunoensaio enzimático
  • 10 resultados possíveis de ELISA
  • 11 Em conclusão

Ensaio imunoabsorvente ligado

O que é análise ELISA
O que é análise ELISA

A análise revela antígenos característicos de certos patógenos e anticorpos contra eles. O ensaio imunoabsorvente enzimático baseia-se na reação de interação de um antígeno com um anticorpo específico, a partir do qual se forma um complexo, que contém um rótulo especial que altera a cor da amostra sob a ação do reagente.

A intensidade da coloração permite julgar a presença de anticorpos ou antígenos característicos de uma determinada infecção e, já com o auxílio do equipamento, é determinada sua quantidade. Os antígenos são substâncias estranhas que causam uma reação de defesa imunológica no corpo - proteínas específicas (imunoglobulinas) são produzidas.

Cada patógeno tem seu próprio conjunto de antígenos, e a resposta imunológica a eles também é específica. O principal material para análise é o sangue de uma veia.

Um ensaio imunoenzimático permite identificar precocemente as doenças latentes com alta precisão, informar o médico sobre o estado geral do paciente e sobre os riscos de desenvolver patologias, sobre o estado de saúde reprodutiva.

É realizada uma análise para diagnosticar doenças virais: herpes, hepatite, citomegalovírus, vírus de Epstein-Barr, etc., infecções sexualmente transmissíveis: gonorréia, ureaplasma, clamidose, micoplasma, Tricomonas, sífilis, para determinar níveis hormonais, diagnosticar câncer e imunodeficiência, detecção e tratamento de alergias. Para a análise, além do sangue, você também pode tirar o líquido cefalorraquidiano, o líquido amniótico e o conteúdo do corpo vítreo.

A análise pressupõe o uso de um grupo de testes ELI:

  • Teste ELI-B, que permite tirar conclusões sobre o estado do sistema imunológico;
  • ELI-Dia-test, que determina o estado do sistema endócrino. Com sua ajuda, o diabetes do primeiro e do segundo tipo é diagnosticado;
  • ELI-N-Complex-12, que informa sobre o estado dos sistemas nervosos periférico e central;
  • ELI-Ankor-test-12, uma análise que avalia o estado do coração e dos vasos sanguíneos, avalia o risco de desenvolver um acidente vascular cerebral, ataque cardíaco;
  • O ELI-Viscero-16 é feito para avaliar o estado geral do paciente. Este teste fornece diagnósticos para 16 indicadores: intestinos, sistema nervoso, miocárdio, rins, sistema imunológico, fígado, estômago, etc.;
  • ELI-P-complex-12 é feito para avaliar a capacidade reprodutiva do corpo;
  • ELI-GIT-12 - uma análise que avalia o estado do trato gastrointestinal e permite prever o risco de desenvolvimento de patologias;
  • Teste ELI-HCG-APS, revela distúrbios de saúde reprodutiva.

Conceitos básicos e princípios do método de imunoensaio enzimático

O ensaio imunoabsorvente enzimático (ELISA) é um método de diagnóstico laboratorial baseado na reação "antígeno-anticorpo", que permite a detecção de substâncias proteicas (incluindo enzimas, vírus, fragmentos bacterianos e outros componentes de fluidos biológicos). Para entender como funciona o imunoensaio enzimático, vamos tentar entender a essência da reação "antígeno-anticorpo". Um antígeno é uma molécula estranha ao corpo, geralmente de origem proteica, que pode entrar no corpo humano junto com um agente infeccioso.

Partículas de sangue de outra pessoa (se não corresponder ao nosso grupo) também são antígenos. No corpo, os antígenos são capazes de causar uma resposta imune que visa proteger a integridade do ambiente interno de substâncias estranhas. Portanto, nosso corpo sintetiza substâncias especiais - anticorpos (imunoglobulinas), capazes de se conectar com antígenos de acordo com o princípio da "chave para travar", ligando-os a um complexo imunológico (esse processo é chamado de reação "antígeno-anticorpo").

Ensaio imunoabsorvente ligado. Esses complexos imunes são mais facilmente reconhecidos e destruídos pelas células imunes. Existem vários tipos de anticorpos, cada um dos quais entra em ação em um estágio específico da resposta imune. Assim, as imunoglobulinas da classe M (IgM) são sintetizadas primeiro em resposta à penetração de um antígeno no corpo.

O conteúdo desses anticorpos é mais alto nos primeiros dias do processo infeccioso. Em seguida, o sistema imunológico libera imunoglobulinas de classe G (IgG) no sangue, que ajudam a destruir os antígenos até que a infecção seja completamente derrotada, e também continuam a circular pelos vasos no futuro, fornecendo imunidade à reinfecção.

A vacinação é baseada neste fenômeno: graças às vacinações contendo antígenos enfraquecidos de micróbios e vírus, uma grande quantidade de IgG aparece em nosso sangue, que, ao entrar em contato com uma ameaça real, rapidamente suprime a infecção - antes que ela prejudique a saúde. Existem também imunoglobulinas classe A (são encontradas em grande quantidade nas membranas mucosas, protegendo as "vias" do corpo), E (combate às infecções parasitárias) e outras.

O que é análise ELISA
O que é análise ELISA

No diagnóstico laboratorial, os objetos de interesse são mais frequentemente IgM, IgG e IgA: por sua concentração, é possível avaliar em que estágio está o processo infeccioso, e também descobrir se uma pessoa já esteve doente com uma ou outra doença (por exemplo, rubéola ou varicela). Como você sabe quais antígenos ou anticorpos estão presentes no corpo humano? Quando um médico suspeita que determinada infecção é a causa da doença, ou deseja medir a concentração de um determinado hormônio, ele prescreve um imunoensaio enzimático para o paciente.

A reação "antígeno-anticorpo" pode ser reproduzida em condições de laboratório: use anticorpos prontos ou antígenos para determinar se o composto correspondente está presente na amostra em estudo. Primeiro, você precisa obter uma amostra de fluido biológico - geralmente soro sanguíneo. O laboratório usa placas de plástico com poços que já contêm antígenos purificados do patógeno suspeito (ou anticorpos se a tarefa for pesquisar um antígeno).

As amostras são colocadas em poços onde - ou não - complexos imunes são formados. Caso o “encontro” tenha ocorrido, um determinado corante entra em reação enzimática com a molécula combinada, o que permite tirar uma conclusão sobre os resultados da análise por meio de uma avaliação instrumental da densidade óptica.

ELISA é qualitativo e quantitativo. No primeiro caso, uma resposta inequívoca está implícita: a substância desejada foi encontrada ou não foi encontrada na amostra.

No caso da análise quantitativa, uma cadeia de reações mais complexa permite avaliar a concentração de anticorpos no sangue humano, o que, em comparação com os resultados de testes anteriores, responderá à questão de como se desenvolve o processo infeccioso. Curiosamente, o precursor do imunoensaio enzimático foi o radioimunoensaio, que usou anticorpos marcados e antígenos para identificar uma reação bem-sucedida. Como a realização de tais diagnósticos representava uma ameaça potencial para a saúde da equipe do laboratório, os cientistas começaram a procurar uma alternativa segura para “manchar” as amostras. Então, em 1971, o IFA foi inventado.

Várias classes de anticorpos IgG, IgM, IgA

O que é análise ELISA
O que é análise ELISA

O ensaio de imunoabsorção enzimática detecta anticorpos de infecções pertencentes a diferentes classes de Ig (G, A, M). Os anticorpos contra o vírus, na presença de infecção, são determinados numa fase muito precoce, o que garante um diagnóstico e controlo eficazes do curso das doenças. Os métodos mais comuns de diagnóstico de infecções são os testes de anticorpos IgM (fase aguda da infecção) e anticorpos IgG (resistentes à infecção). Esses anticorpos são determinados para a maioria das infecções.

No entanto, um dos testes mais comuns - triagem hospitalar (testes de HIV, sífilis e hepatite B e C) não diferencia o tipo de anticorpos, uma vez que a presença de anticorpos para os vírus dessas infecções sugere automaticamente um curso crônico da doença e é uma contra-indicação, por exemplo, para intervenções cirúrgicas graves. Portanto, é importante refutar ou confirmar o diagnóstico.

Ensaio imunoabsorvente ligado. Um diagnóstico detalhado do tipo e quantidade de anticorpos em uma doença diagnosticada pode ser feito passando uma análise para cada infecção específica e tipo de anticorpos. A infecção primária é detectada quando um nível significativo de diagnóstico de anticorpos IgM é detectado em uma amostra de sangue ou um aumento significativo no número de anticorpos IgA ou IgG em soros pareados tomados com um intervalo de 1-4 semanas.

A reinfecção, ou reinfecção, é detectada por um rápido aumento nos níveis de anticorpos IgA ou IgG. Os anticorpos IgA são mais elevados em pacientes mais velhos e diagnosticam com mais precisão a infecção atual em adultos.

A infecção anterior no sangue é definida como aumento de anticorpos IgG sem aumento em sua concentração em amostras pareadas coletadas com um intervalo de 2 semanas. Ao mesmo tempo, não há anticorpos das classes A e IgM.

Anticorpos IgM

O que é análise ELISA
O que é análise ELISA

Sua concentração aumenta logo após a doença. Os anticorpos IgM são detectados logo 5 dias após seu início e atingem um pico no intervalo de uma a quatro semanas, então diminuem para níveis diagnósticos insignificantes dentro de vários meses, mesmo sem tratamento. Porém, para um diagnóstico completo, não basta determinar apenas os anticorpos da classe M: a ausência dessa classe de anticorpos não significa ausência da doença. Não existe uma forma aguda da doença, mas pode ser crônica.

Os anticorpos IgM são de grande importância no diagnóstico da hepatite A e infecções infantis (rubéola, coqueluche, varicela), facilmente transmitidas por gotículas aéreas, pois é importante identificar a doença o mais cedo possível e isolar o doente.

Anticorpos IgG

O principal papel dos anticorpos IgG é a proteção de longo prazo do corpo contra a maioria das bactérias e vírus - embora sua produção ocorra mais lentamente, a resposta a um estímulo antigênico permanece mais estável do que a dos anticorpos da classe IgM.

Ensaio imunoabsorvente ligado. Os níveis de anticorpos IgG aumentam mais lentamente (15-20 dias após o início da doença) do que os de IgM, mas permanecem elevados por mais tempo e, portanto, podem mostrar uma infecção de longa data na ausência de anticorpos IgM. Os níveis de IgG podem ser baixos por muitos anos, mas com a exposição repetida ao mesmo antígeno, os níveis de anticorpos IgG aumentam rapidamente.

Para um quadro diagnóstico completo, é necessário determinar anticorpos IgA e IgG simultaneamente. Se o resultado de IgA não for claro, confirmação por determinação de IgM. No caso de um resultado positivo e para um diagnóstico preciso, um segundo teste, feito 8-14 dias após o primeiro, deve ser verificado em paralelo para determinar o aumento da concentração de IgG. Os resultados da análise devem ser interpretados em conjunto com as informações obtidas em outros procedimentos de diagnóstico.

Os anticorpos IgG, em particular, são usados para diagnosticar Helicobacter pylori, uma das causas de úlceras e gastrite.

Anticorpos IgA

Eles aparecem no soro 10-14 dias após o início da doença e, a princípio, podem até ser encontrados nos fluidos seminal e vaginal. Os níveis de anticorpos IgA geralmente diminuem de 2 a 4 meses após a infecção se o tratamento for bem-sucedido. Após a reinfecção, o nível de anticorpos IgA aumenta novamente. Se o nível de IgA não cair após o tratamento, isso é um sinal de uma forma crônica de infecção.

Vantagens do método

As vantagens indiscutíveis do ELISA são a alta sensibilidade e especificidade do método. Sensibilidade é a capacidade de reconhecer a substância alvo, mesmo que sua concentração na amostra seja baixa. A especificidade, por outro lado, implica na precisão do diagnóstico: se o resultado for positivo, significa que foi encontrado exatamente o anticorpo ou antígeno que se presumiu, e não alguns outros.

O ensaio de imunoabsorção enzimática substituiu amplamente o "padrão ouro" da microbiologia - um método de diagnóstico bacteriológico, durante o qual, para identificar um patógeno, era necessário isolá-lo do corpo e, em seguida, cultivar a cultura em um meio nutriente em um tubo de ensaio por vários dias. O tempo todo, durante a realização da análise, os médicos eram obrigados a tratar o paciente "às cegas", adivinhando a origem do microrganismo pelos sintomas da doença.

A determinação de IgM por ELISA permite fazer um diagnóstico preciso nos primeiros dias da doença. O alto grau de fabricação do imunoensaio enzimático minimiza a influência do fator humano, o que reduz a probabilidade de erro. A maioria dos kits de teste ELISA e reagentes utilizados em modernos laboratórios são fabricados em ambiente industrial, o que garante um resultado preciso.

Desvantagens do método

O que é análise ELISA
O que é análise ELISA

Infelizmente, para realizar o ELISA, você precisa saber exatamente o que procurar: a técnica de análise implica que o médico tem uma suposição prévia sobre a natureza da doença. Portanto, não faz sentido prescrever tal teste na esperança de acidentalmente "adivinhar" o diagnóstico. No caso de diagnóstico de doenças infecciosas, um ensaio imunoenzimático não consegue encontrar o patógeno e determinar suas propriedades específicas: ele apenas indica a presença de anticorpos no sangue do paciente, indicando indiretamente a presença de um microrganismo estranho no corpo humano.

O ELISA é um método extremamente preciso, mas não barato, então você precisa usá-lo com sabedoria e um médico qualificado deve interpretar os resultados.

Indicações para consulta e doenças detectadas

É impossível cobrir a lista completa de indicações para ELISA. Os objetivos mais comuns da análise são: Diagnóstico de doenças infecciosas agudas e crônicas:

  • IgM e IgG para hepatite viral A, B, C, E, bem como antígenos da hepatite B e C;
  • IgG para HIV; Infecção por Ig M e IgG por citomegalovírus;
  • Ig M e IgG ao vírus Epstein-Barr; Ig M e IgG para infecções por herpes;
  • Ig M e IgG para toxoplasmose;
  • Ig M e IgG para sarampo, rubéola, salmonelose, disenteria, encefalite transmitida por carrapatos e outras doenças;
  • IgG para doenças parasitárias;
  • Ig M e IgG para infecções sexualmente transmissíveis;
  • Infecção por IgG para Helicobacter pylori.

Avaliação geral de indicadores de imunidade humana e marcadores de algumas doenças autoimunes. Identificação de marcadores oncológicos (fator de necrose tumoral, antígeno prostático específico, antígeno cancerígeno embrionário e outros). Determinação do conteúdo de hormônios no soro sanguíneo (progesterona, prolactina, testosterona, hormônio estimulador da tireoide e outros).

O biomaterial analisado e características de seu acervo

O que é análise ELISA
O que é análise ELISA

O principal biomaterial do ELISA é o soro sanguíneo: no laboratório, uma amostra de sangue é retirada do paciente de uma veia, da qual são retirados os elementos moldados que dificultam a análise. Em alguns outros casos, líquido cefalorraquidiano, líquido amniótico, esfregaços de membranas mucosas, etc. são usados para análise.

Para evitar distorções nos resultados, recomenda-se doar sangue com o estômago vazio e duas semanas antes do estudo (se o objetivo for diagnosticar doenças infecciosas latentes e crônicas), é necessário interromper o uso de antibióticos e antivirais. Condições de preparação dos resultados do ELISA Se você tiver os reagentes necessários e uma boa organização do laboratório, receberá o resultado do teste 1–2 dias após a coleta de sangue. Em alguns casos, se uma resposta de emergência for necessária, esse período pode ser reduzido para 2-3 horas.

Os resultados IFA estão prontos

Se você tiver os reagentes necessários e uma boa organização do laboratório, receberá o resultado do teste em 1–2 dias após a coleta de sangue. Em alguns casos, se uma resposta de emergência for necessária, esse período pode ser reduzido para 2-3 horas.

Decodificação de imunoensaio enzimático

O resultado de um ELISA de alta qualidade será um veredicto inequívoco: a substância desejada foi encontrada ou não foi encontrada na amostra. Se estamos falando de análise quantitativa, então a concentração pode ser expressa como um valor numérico ou um certo número de sinais "+" (de um a vários).

Indicadores analisados:

  • IgM - a presença desta classe de imunoglobulinas indica um processo infeccioso agudo no organismo. A ausência de IgM pode indicar a ausência de um patógeno específico no corpo e a transição da infecção para o estágio crônico.
  • IgA com um teste de IgM negativo geralmente indica uma infecção crônica ou latente. IgM e IgA (presença conjunta) - dois resultados positivos indicam o auge da fase aguda da doença.
  • IgG fala sobre a cronicidade da doença ou sobre a recuperação e o desenvolvimento de imunidade a um agente infeccioso.

Possíveis resultados de ELISA

O que é análise ELISA
O que é análise ELISA

Dependendo do conteúdo da análise, o formulário pode apresentar dados na forma de uma tabela listando todos os anticorpos ou antígenos com notas sobre uma reação negativa ou positiva, ou o valor quantitativo do resultado (negativo, fracamente positivo, positivo ou agudamente positivo) será indicado. A última opção determina quantos anticorpos estão contidos na amostra analisada. Outro indicador quantitativo é o índice de avidez do anticorpo, expresso em porcentagem.

Indica quanto tempo se passou desde o início do processo infeccioso (quanto maior o índice, mais).

Hoje, milhares de tipos de sistemas de teste ELISA são produzidos, permitindo a detecção de anticorpos e antígenos específicos em uma ampla variedade de patologias.

Portanto, esta análise é usada em quase todas as indústrias médicas. O diagnóstico feito com o auxílio do ELISA é a garantia da indicação de uma terapia adequada e do tratamento eficaz da doença.

Finalmente

Às vezes, tendo detectado anticorpos IgG nos resultados do teste, por exemplo, toxoplasmose ou herpes, os pacientes entram em pânico ao não verem que os anticorpos IgM que indicam a presença de uma infecção atual podem não estar presentes. Nesse caso, a análise fala de uma infecção anterior, para a qual se desenvolveu a imunidade.

Em qualquer caso, é melhor confiar a interpretação dos resultados da análise ao médico, e com ele, se necessário, determinar as táticas de tratamento.

Descubra mais:

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